2002年度

Journal of Biochemical and Biophysical Methods

301207
Novel approach for the effective determination of DNA scission site using the Sanger method
坂本文徳 ; 鈴木英治* ; 藤井有起*
Journal of Biochemical and Biophysical Methods 52(2), p.97-109(2002) ; (JAERI-J 19621)

　遺伝子研究の隆盛により，多くの分野でDNA本体を対象とした研究が広範に行われている．その一つとして，研究者の希望する位置でDNAを切断させる研究が行われているが，DNAの切断位置の特定はマキサム−ギルバート法を利用する手法が一般的だった．しかし，この手法は煩雑な点や不確実な点が多く，あまり利用されてこなかった．そこで，それらの問題点を改善する目的で，³²Pとサンガー法を利用した特定法を新規に開発した．この新規手法は，切断されたDNAを³²Pにより標識し，ポリアガロースゲル電気泳動後に，基準となる塩基配列とその³²P標識DNAを比較することにより切断位置を特定するものである．この手法により，DNA切断位置の特定が，従来の方法に比べ，より簡便でより確実性が増し，また特定に要する時間は半分程度に短縮できた．さらに，この特定法の有効性を示すため，DNA切断物質の一種であるCu(II)TACH錯体によるDNAの切断位置を特定した．