放射線抵抗性細菌由来DNA修復促進タンパク質の機能欠損変異体の解析

Analysis of functionally deficient mutant of the DNA repair promoting protein from the radioresistant bacterium

鳴海 一成; 大庭 寛史*; Sghaier, H.*; Van Long, N.*; 佐藤 勝也*

Narumi, Issei; Oba, Hirofumi*; Sghaier, H.*; Van Long, N.*; Sato, Katsuya*

放射線抵抗性細菌由来のタンパク質PprAは、で、DNA切断末端に結合し、エキソヌクレアーゼからDNA末端を保護すると同時に、ATP依存性並びにNAD依存性DNAリガーゼによるDNA末端結合反応を促進する活性を有しており、DNA修復促進タンパク質として、放射線抵抗性細菌に独特なDNA末端結合修復機構において重要な役割を担っていると考えられている。今回、PprAタンパク質のDNA結合活性に必要な領域を明らかにする目的で、変異型遺伝子を発現している大腸菌BL21(DE3)株のコロニーの生育が、野生型遺伝子を発現している形質転換体よりも早いことを利用して、ランダム変異導入によるPprAタンパク質の機能欠損変異体の選抜を試みた。現在までに、Error-prone PCR法で9種類、ヒドロキシルアミン処理で2種類のアミノ酸置換変異体を選抜した。選抜した変異体のアミノ酸置換のほとんどは、133番目から210番目までのアミノ酸配列中に存在しており、この領域がPprAタンパク質のDNA結合能に重要な役割を果たしていると考えられた。

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