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DNA repair-promoting protein; Applications to biotech industry鳴海 一成; 大庭 寛史; Sghaier, H.; 佐藤 勝也
no journal, ,
放射線抵抗性細菌デイノコッカス・ラジオデュランスの著しく高いDNA修復能力の原因となっている遺伝子を同定し、遺伝子から作られるタンパク質PprAの生化学的性質を調べた。その結果、PprAタンパク質は、DNA鎖切断を認識して結合することで、放射線照射などで生じたDNA損傷の修復を高効率で促進することがわかった。DNAクローニング技術に頻繁に使用されているDNAリガーゼとPprAタンパク質とを組合せることで、新しいバイオ研究試薬の技術移転に成功し、ニッポンジーンから高効率のDNA修復試薬"TA-Blunt Ligation Kit"が発売された。この試薬は、今後、遺伝子診断や新薬開発など生命科学分野における幅広い使用が見込まれる。
大庭 寛史; Sghaier, H.; 佐藤 勝也; 鳴海 一成
no journal, ,
放射線抵抗性細菌デイノコッカス・ラジオデュランスのDNA修復促進タンパク質PprAの放射線照射後における遺伝子発現誘導にかかわる因子としてPprIタンパク質を同定した。しかしながら、PprIタンパク質は
遺伝子プロモーターには直接結合しないことから、PprI以外に放射線誘導性のDNA修復遺伝子の発現調節にかかわる因子があると考えられた。そこで、野生株と
遺伝子破壊株のタンパク質のプロファイルを2次元電気泳動解析により比較したところ、遺伝子破壊株のみで発現するタンパク質を見いだした。PprMと命名したこのタンパク質の性質を調べた結果、pprMタンパク質が遺伝子の発現を転写レベルで制御していることがわかった。これらの結果から、PprMタンパク質は、PprIタンパク質に調節されるデイノコッカス・ラジオデュランスの放射線応答機構に関与していることが明らかになった。
provides insights into ancestral recombinational DNA repairSghaier, H.; 大庭 寛史; 佐藤 勝也; 三友 宏志*; 鳴海 一成
no journal, ,
DNA組換え修復機構は、3.8億年前に既に微生物が獲得していた機構である。また、放射線抵抗性好熱菌は原始的細胞体であり、放射線抵抗性は主要な遺伝子プールから特定の細胞体が獲得した形質であると考えられる。したがって、放射線抵抗性で中等度好熱性であるデイノコッカス・ジオサーマリスのDNA修復に関係する組換えタンパク質RecAを解析することによって、生物のDNA修復の起源とその進化についての研究を行うことができる。そこで、デイノコッカス・ジオサーマリスからクローニングした
遺伝子を大腸菌で発現させ、その性質を遺伝学的,生化学的及び生物情報学的解析方法で調べた。その結果、RecAタンパク質とDNAの結合は、DNA配列には依存せずDNA構造に強く依存すること及び実験条件でその結合性が著しく変化することがわかった。また、真正細菌におけるRecAタンパク質の構造と機能の進化について考察した。