Reconstitution of the muscle thin filament from recombinant troponin components and the native thin filaments

組み換えトロポニン成分及び天然の細いフィラメントからの筋肉の細いフィラメントの再構成

松本 富美子; 弟子丸 俊吾*; 小田 俊郎*; 藤原 悟

Matsumoto, Fumiko; Deshimaru, Shungo*; Oda, Toshiro*; Fujiwara, Satoru

天然の筋肉の細いフィラメント及び大腸菌に発現させた組換えトロポニン構成成分から筋肉の細いフィラメントを再構成する技術を開発した。この技術により、pH6.2において20%グルセロール及び0.3M KCl存在下で、再構成されたトロポニン複合体が天然の細いフィラメント中に交換導入される。90%以上の内在トロポニン複合体が組換えトロポニン複合体に交換される。この技術により調製された再構成細いフィラメントの構造及びCa感受性が保持されることが、X線繊維回折測定、並びに、細いフィラメントにより活性化されるミオシンサブフラグメント1のATP分解活性の測定により確認された。

We have developed a technique by which muscle thin filaments are reconstituted from the recombinant troponin components and the native thin filaments. By this technique, the reconstituted troponin complex is exchanged into the native thin filaments in the presence of 20% glycerol and 0.3 M KCl at pH 6.2. Over 90% of endogenous troponin complex was replaced with the recombinant troponin complex. Structural integrity and Ca-sensitivity of the reconstituted thin filament prepared by this technique was confirmed by X-ray fiber diffraction measurements and the thin filament activated myosin subfragment 1 ATPase measurements, respectively.