Crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of tetrathionate hydrolase from

由来テトラチオン酸加水分解酵素の結晶化とX線回折実験

金尾 忠芳*; 小坂 恵*; 吉田 京矢*; 中山 久之*; 玉田 太郎; 黒木 良太; 山田 秀徳; 高田 潤*; 上村 一雄*

Kanao, Tadayoshi*; Kosaka, Megumi*; Yoshida, Kyoya*; Nakayama, Hisayuki*; Tamada, Taro; Kuroki, Ryota; Yamada, Hidenori; Takada, Jun*; Kamimura, Kazuo*

鉄硫黄酸化細菌由来テトラチオン酸加水分解酵素(tetrathionate hydrolase)は無機硫黄化合物の加水分解を触媒する。組換え型酵素-Tthを大腸菌を用いて封入体として発現し、酸性条件下で活性体に巻き戻した後に、単一に精製した。-Tthの結晶は、沈澱剤溶液を33%() PEG 1000、50m塩化ナトリウム、20mグリシン緩衝液(pH10)としたハンギングドロップ蒸気拡散法により、取得された。結晶は0.20.050.05mmの六角柱状で、X線回折実験の結果、2.15分解能の回折点が確認され、結晶の空間群は3もしくは3、格子定数は==92.1, =232.6であった。

Tetrathionate hydrolase (4THase) from the iron- and sulfur-oxidizing bacterium catalyses the disproportionate hydrolysis of tetrathionate to elemental sulfur, thiosulfate and sulfate. The gene encoding 4THase () was expressed as inclusion bodies in recombinant . Recombinant -Tth was activated by refolding under acidic conditions and was then purified to homogeneity. The recombinant protein was crystallized in 20 m glycine buffer pH 10 containing 50 m sodium chloride and 33%() PEG 1000 using the hanging-drop vapour-diffusion method. The crystal was a hexagonal cylinder with dimensions of 0.2 0.05 0.05 mm. X-ray crystallographic analysis showed that the crystal diffracted to 2.15 resolution and belongs to space group 3 or 3, with unit-cell parameters = = 92.1, = 232.6 .