Initialising ...
Initialising ...
Initialising ...
Initialising ...
Initialising ...
Initialising ...
Initialising ...
小田 隆; 井上 倫太郎*; 守島 健*; 大井 里香*; 石野 良純*; 佐藤 衛*; 杉山 正明*
no journal, ,
生体内のタンパク質には複数のドメインが天然変性と呼ばれる非常にフレキシブルな領域でつながれたもの(マルチドメインタンパク質)が存在する。マルチドメインタンパク質は構造の柔軟性が機能と密接に結びついている。しかし、柔軟性ゆえに結晶構造解析やクライオ電子顕微鏡による構造解析が困難であり、構造と機能の関係の理解が難しい。我々はDNAの損傷の修復にかかわるHefタンパク質を例に、柔軟な構造の解析を試みた。X線小角散乱解析ではHefが水溶液中で取りうる構造をアンサンブルとして解析した。しかし、分子全体からの散乱であるX線小角散乱では、アンサンブルを十分に決定できない。そこでHefを構成する複数のドメインのうちの一つを重水素化した区分重水素化Hefを調製し、中性子小角散乱による解析を試みた。この方法では重水素化を行っていない部分からの散乱のみを観測できるため、X線小角散乱解析と合わせることでアンサンブルをより正確に決定できると期待される。発表では区分重水素化試料の調製法、中性子小角散乱測定、および予備的解析について報告する。
小田 隆; 井上 倫太郎*; 守島 健*; 會澤 直樹*; 大井 里香*; 石野 良純*; 奥 隆之; 佐藤 衛*; 杉山 正明*
no journal, ,
複数のドメインと天然変性領域から構成されるマルチドメインタンパク質の柔軟な構造は、機能に密接に関連している。しかし、その柔軟性のため、従来の構造生物学的手法による解析が困難である。我々はX線小角散乱と計算科学を用いてHefの動的な構造をアンサンブルとして解析したが、複数のドメインと天然変性領域からの散乱を含む1本の散乱プロファイルのみでは正しい構造アンサンブルの算出には不十分である。これを解決するためにタンパク質の特定の領域の構造情報を選択的に取得する手法の開発を行った。特定の領域のみを75%重水素化し、残りの部分は軽水素体のHefを調製し(区分重水素化Hef)、100%重水中で中性子小角散乱測定を行った。これにより75%重水素化ドメインは散乱的に不可視化され、軽水素体部分のみの散乱を観測でき、X線小角散乱データと相補的に解析することで柔軟な構造の解析が可能になる。本手法は様々なマルチドメインタンパク質の動的構造解析への応用が期待できる。発表では区分重水素化試料の調製、中性子小角散乱測定および予備的なデータ解析について報告する。