シロイヌナズナAtREV1タンパク質のポリメラーゼ活性

Deoxynucleotidyl transferase activity of Arabidopsis AtREV1 protein

高橋 真哉*; 坂本 綾子; 清水 喜久雄*; 田中 淳

Takahashi, Shinya*; Sakamoto, Ayako; Shimizu, Kikuo*; Tanaka, Atsushi

DNA損傷乗り越え複製(TLS)は、さまざまなDNA変異原に対する曝露によって生じるDNA損傷の影響を回避するために、生物が備えている機構の一つである。われわれはこれまでに、酵母の誤りがち損傷乗り越え複製(error prone TLS)にかかわる遺伝子のシロイヌナズナにおけるホモログである遺伝子を同定した。遺伝子破壊系統()は、UV-BやDNA架橋剤に対して感受性を示すことから、植物にも他の生物同様error-prone TLSが存在し、さまざまなDNA損傷の回避に関与している可能性が示唆されている。今回さらに詳細な研究を行うために、大腸菌タンパク質過剰発現系を用いてAtREV1組み換えタンパク質を作成し、ポリメラーゼ活性の検出を試みた。AtREV1タンパク質はアフィニティカラム及びイオン交換カラムにて精製し、得られた精製タンパク質を用いてprimer extension法による塩基挿入活性の測定を行った。AtREV1組み換えタンパク質は、鋳型DNAの塩基にかかわらず、プライマー末端にシトシンを挿入した。鋳型DNAのグアニンに対しては、チミンを挿入する活性も見られた。また、弱いながらも正確な塩基の挿入も観察された。これらの結果から、AtREV1タンパク質はシチディルトランスフェラーゼ活性を持つ「忠実度の低い」DNAポリメラーゼであることが明らかとなった。

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