Crystallization of porcine pancreatic elastase and a preliminary neutron diffraction experiment

ブタ膵臓エラスターゼの結晶化と中性子回折実験

木下 誉富*; 玉田 太郎; 今井 啓介*; 栗原 和男; 大原 高志   ; 黒木 良太

Kinoshita, Takayoshi*; Tamada, Taro; Imai, Keisuke*; Kurihara, Kazuo; Ohara, Takashi; Kuroki, Ryota

ブタ膵臓エラスターゼは、炎症性疾患の原因となる好中球エラスターゼによく似た特徴を有することから、代表的な創薬標的タンパク質の一つである。エラスターゼに共有結合した阻害剤の水素原子を含む構造的な特徴を調べるために、蒸気拡散法により0.2M硫酸ナトリウムを含む重水緩衝液(pD=5.0)中で1.6mmの大きさの単結晶を作製した。この結晶を用いることにより原子力機構のJRR-3に設置されたBIX3中性子回折計で測定を行った結果、空間群P212121,格子長a=51.2, b=57.8, c=75.6, 2.3分解能の中性子回折データの取得に成功した。

Porcine pancreatic elastase (PPE) resembles the attractive drug target leukocyte elastase, which has been implicated in a number of inflammatory disorders. In order to investigate the structural characteristics of the covalent inhibitor bound to PPE, including hydrogen and hydration of water, a single crystal of PPE for neutron diffraction study was grown in DO containing 0.2 M sodium sulfate (pD=5.0) using the sitting-drop vapor diffusion method. The crystal was grown to a size of 1.6 mm by repeated macro-seeding. The neutron diffraction data were collected at room temperature using a BIX-3 diffractometer at the JRR-3 research reactor of the Japan Atomic Energy Agency (JAEA). The data set was integrated and scaled to 2.3 resolution with space group P212121 and cell dimensions of a=51.2, b=57.8 and c=75.6.