Purification, crystallization and preliminary X-ray diffraction analysis of DNA damage response A protein from

DNA損傷応答タンパク質Aの精製,結晶化及びX線回折分析

山田 貢; 佐藤 勝也; 鳴海 一成

Yamada, Mitsugu; Sato, Katsuya; Narumi, Issei

放射線抵抗性細菌由来のDNA損傷応答タンパク質(DdrA)は、一本鎖DNAの3'末端に結合し、DNA分解酵素からDNA末端を保護することで、DNA修復過程に関与していると考えられている。本研究では、タンパク質構造情報に基づいてDdrAタンパク質の生理的役割を明らかにする目的で、N末端から157残基のアミノ酸配列からなるC末端欠損DdrAタンパク質の結晶を作製し、KEK-PFのBL5ビームラインにてX線結晶回折実験を行った。その結果、最高2.35の分解能の回折像を得ることに成功した。結晶は、擬欠面双晶の非対称ユニット中に14分子を含んでおり、7量体リングが2つ重なった高次構造を有していると考えられた。

DNA damage response A protein (DdrA) from has been suggested to be involved in DNA repair processes through binding to 3' ends of single-stranded DNA, thereby protecting the ends from nuclease digestion. In this study, a recombinant C-terminal truncated form of DdrA (DdrA157), comprising of the first 157 residues of DdrA, was expressed in , purified and crystallized. Single crystals of DdrA157 were obtained by a hanging drop method at 293 K. The crystal belonged to the monoclinic space group 2, with unit-cell parameters = 46.31, = 180.26, = 114.17 , = 90.02. The crystal was expected to contain fourteen molecules in the asymmetric unit. Diffraction data were collected to 2.35 resolution at beamline BL-5 of the Photon Factory and initial phase determinations were attempted by a molecular-replacement method using the human Rad52 structure.