Three-dimensional culture of HeLa-Fucci cells for study of bystander effect through gap-junction

ギャップ結合を介したバイスタンダー効果研究のためのHeLa-Fucci細胞の三次元培養法の開発

坂本 由佳; 野口 実穂; 藤井 健太郎; 横谷 明徳

Sakamoto, Yuka; Noguchi, Miho; Fujii, Kentaro; Yokoya, Akinari

スフェロイドとは細胞が多数凝集して3次元状態になったものを指す。通常のディッシュ等を用いて単層培養に比べると長期間細胞の機能を維持でき、より生体に近い培養方法であると言える。これまで放射線に対する細胞応答の研究は数多くなされてきたが、その多くは単層培養した細胞についてであった。本研究では、X線照射に対するスフェロイドの感受性とDSBの発生頻度との相関を明らかにすることを目的とし、スフェロイドを作成するための様々な条件を検討した。その結果、低付着性のマルチプレート培養ディッシュを用いることで、数100マイクロメーター程度のヒト細胞(HeLe細胞)のスフェロイドが安定して作成できることを確認した。共焦点顕微鏡によりスフェロイド内部の細胞状態を観察したところ、500マイクロメートル程度の大きさまで成長したスフェロイドではその内部が低酸素のため分裂死を起こしていることが分かった。このため実験には、これより小さなスフェロイドを用いることが必要である。得られたスフェロイドに対してX線照射を行い、コロニー形成法で調べた生存率を単層培養細胞の結果と比較したところ両者に大きな差はなかった。

no abstracts in English