Expression of the extracellular region of the human interleukin-4 receptor chain and interleukin-13 receptor 1 chain by a silkworm-baculovirus system

カイコ/バキュロウイルス系を用いたヒト・インターロイキン-4受容体鎖及びインターロイキン-13受容体1鎖細胞外領域の発現

本庄 栄二郎; 正山 祥生; 玉田 太郎; 重松 秀樹*; 畠中 孝彰*; 金地 佐千子*; 有馬 和彦*; 伊東 祐二*; 出原 賢治*; 黒木 良太

Honjo, Eijiro; Shoyama, Yoshinari; Tamada, Taro; Shigematsu, Hideki*; Hatanaka, Takaaki*; Kanaji, Sachiko*; Arima, Kazuhiko*; Ito, Yuji*; Izuhara, Kenji*; Kuroki, Ryota

インターロイキン-13に対する受容体はインターロイキン-131鎖及びインターロイキン-4鎖からなる。これらの相互作用を調べるため、IL-13受容体1鎖及びIL-4受容体鎖細胞外領域をコードするDNAをマウスIgGのFcと融合体としてカイコ/バキュロウイルス系で発現した。受容体はプロテインAカラムを用いて回収し、トロンビン消化でFcと切り離すことができた。ゲルろ過やSPR分析の結果、IL-13とIL-13受容体1鎖複合体はIL-4受容体と結合したが、IL-13やIL-13受容体1鎖単独でのIL-4受容体との相互作用は見られなかった。これらの結果から、IL-13はIL-13受容体1と相互作用し、さらにIL-4受容体と結合することが明らかとなった。

The receptor binding to Interleukin (IL)-13 is composed of the IL-13 receptor 1 chain (IL-13R 1) and the IL-4 receptor chain (IL-4R ). In order to investigate the interaction of IL-13 with IL-13R 1 and IL-4R , the DNA fragments coding the extracellular regions of human IL-13R 1 and the IL-4R were fused with mouse Fc and expressed by a silkworm-baculovirus system. The expressed receptors were successfully purified by affinity chromatography using protein A, and the Fc region was removed by thrombin digestion. Size exclusion chromatography and SPR analysis revealed that mixture of IL-13 and IL-13R1 showed predominant affinity to IL-4R, although neither detectable affinity of IL-13 nor IL-13R1 was observed against IL-4R. Combining these data with the moderate affinity of IL-13 to IL-13R1, this indicates that IL-13 first binds to IL-13R1 and recruits consequently to IL-4R.