Application of real time PCR for the quantitative detection of radiation-induced genomic DNA strand breaks

ゲノムDNAに生じた放射線誘発鎖切断の定量へのリアルタイムPCRの応用

山内 恵美子*; 渡辺 立子; 及川 美代子*; 藤本 浩文*; 山田 明徳*; 斎藤 公明  ; 村上 正弘*; 橋戸 和夫*; 土田 耕三*; 高田 直子*; 普後 一*; Tu, Z.*; 前川 秀彰*

Yamauchi, Emiko*; Watanabe, Ritsuko; Oikawa, Miyoko*; Fujimoto, Hirofumi*; Yamada, Akinori*; Saito, Kimiaki; Murakami, Masahiro*; Hashido, Kazuo*; Tsuchida, Kozo*; Takada, Naoko*; Fugo, Hajime*; Tu, Z.*; Maekawa, Hideaki*

PCR(ポリメラーゼ連鎖反応)法を用いて、Cs-137線照射によるpBR322プラスミドDNAの両方の鎖それぞれに生じた1本鎖切断の収率を測定する方法を確立した。本研究では、PCRによる増幅を経時的に測定することで、増幅率をreal-time PCRがDNA切断数の収量の絶対値測定に応用・有用であることを初めて示した。この方法によるSSB収率の実験結果は、モンテカルロシミュレーションによる計算結果と非常によい一致を示したことによっても実証された。

The frequency of single strand breaks (SSBs) occurring on both strands of the pBR322 plasmid DNA region flanked by a pair of primers used for polymerase chain reaction (PCR) amplifications was determined after irradiation with Cs -rays. We refined that real time PCR is suitable for the detection and quantitative analysis of SSBs caused by -ray irradiation. The utility of this approach was also supported by the comparison of the practical experimental data with the Monte Carlo simulation. The potential application of this PCR method for the detection of genomic DNA damage was also confirmed.